在PCR实验室进行相关实验操作的时候，总会出现各种各样的问题，比如以下这些！

PCR实验室PCR常见问题一、无扩增条带

可能的原因：

• 酶失活或在反应体系中未加入酶。失活更换新酶或用另一来源的酶即可解决。

• 模板含有杂质。比如固定及石蜡包埋的组织就含有甲酸，这样就很有可能造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果，所以我们要先去除模板的杂质。

• 变性温度不准确。过高酶失活；过低则模板变性不彻底。

• 引物变质失效。

• 引物错误。可以利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

• DNA凝胶和PCR程序的问题。判断是否是因为这个问题导致的，可以在进行DNA凝胶电泳时加入阳性对照进行筛查等等。

PCR实验室PCR常见问题二、PCR产物量过少

可能的原因：

• 退火温度不合适。

• DNA模板量太少。这时候可以适当增加DNA模板量。

• PCR循环数不足。同理，可以适当增加反应循环数。

• 引物量不足。一样，可以适当增加体系中引物含量。

• 延伸时间太短。以1kb/分钟的原则设置延伸时间。

• 变性时间过长。

• DNA模板中存在抑制剂等等。

PCR实验室PCR常见问题三、扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散

可能的原因：

• 酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。

• dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。

• MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。

• 模板量过多。

• 引物浓度不够优化。可与对引物进行梯度稀释重复PCR反应。

• 退火温度过低。

• 电泳体系有问题：凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大；凝胶没有凝固好；琼脂糖质量差。

• PCR试剂盒有问题：运输储存不当引起试剂盒失效；试剂盒本身质量问题，如引物选择、循环参数等选择不当等等。

PCR实验室PCR常见问题四、扩增产物出现多条带 （杂带）

可能的原因：

• 引物用量偏大，引物的特异性不高。可以调换引物或降低引物的使用量。

• 循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。

• 酶的用量偏高或酶的质量不好，可以降低酶量或调换另一来源的酶。

• 退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。

• 若为PCR试剂盒，也可能时试剂盒本身质量有问题。

• 反应缓冲液未完全融化或未充分混匀。确保反应缓冲液融化完全并彻底混匀。

• 引物特异性差。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

• 引物量过多。减少反应体系中引物的用量。

• 模板量过多。

• 外源DNA污染等等。

以上就是PCR实验室PCR我们常见的问题了，造成这问题出现的原因也做了详细的解释说明，还有任何疑问的，可直接咨询南京东极生物！

文章出自 科研实验外包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/